Ce trebuie luat în considerare atunci când alegeți microscopul potrivit pentru sistemul de imagistică cu celule vii

Pentru a efectua cu succes experimente de imagistică cu celule vii, este esențială utilizarea abordării corecte. Atunci când alegeți un microscop potrivit pentru imagistica cu celule vii, trebuie luate în considerare următoarele aspecte: viabilitatea probei, viteza de achiziție a imaginii (rezoluție temporală) și rezoluția necesară în toate cele trei dimensiuni.

During live cell imaging, certain environmental conditions must be maintained to avoid detrimental physiological changes. In order to capture physiologically relevant cellular dynamics, live cell experiments require specific environmental conditions, including temperature, pH (via CO2), and humidity control. Furthermore, some experiments may even require hypoxic conditions. Modern incubation systems not only tightly control environmental conditions, they can also provide detailed data reports and alert users to temperature, gas, or humidity variations during the course of an imaging experiment. To minimize or avoid the effects of photodamage, getting the right balance between sensitive detection, accurate label separation (if using >1) și cea mai mică doză de lumină pentru excitare este crucială.

Pentru experimentele cu celule vii, achiziția de mare viteză este adesea critică, în special pentru studiul proceselor dinamice rapide, cum ar fi observarea veziculelor. Folosirea filtrelor optice are ca rezultat limitări de viteză, datorită necesității pentru imagini secvențiale atunci când se schimbă seturile de filtre pentru fiecare culoare, utilizate pentru a studia interacțiunea mai multor componente. Colectarea secvenţială a imaginilor necesită mai mult timp decât strângerea simultană a imaginilor şi, ca rezultat, mişcările rapide ale specimenului pot fi ratate în timpul achiziţiei, deoarece fiecare culoare are un interval de timp mai lung de la o imagine la alta. În plus, atunci când comparația directă între două sau mai multe culori este esențială, semnalele s-ar putea să se fi mutat chiar și între achiziția individuală a fluoroforilor, complicând interpretarea datelor.

Sunt disponibile mai multe tehnologii pentru achiziționarea de imagini în 3 dimensiuni în timp. Alegerea sistemului depinde de experimentul dvs. și dacă viteza mai mare sau iluminarea eșantionului mai mică în timpul imaginii este prioritatea dvs. atunci când obțineți rezoluția 3D dorită. Alegerea celui mai potrivit sistem v-a impus în mod tradițional să alegeți între un sistem de imagistică cu celule vii bazat pe cameră sau confocal, totuși soluțiile moderne pot oferi ambele modalități într-un mod integrat.